Forskere rutinemessig overvåke cellevekst . Det kan være en del av vanlig celle vedlikehold , eller som del av et eksperiment. For eksempel kan et eksperiment settes opp for å sammenligne virkningen av tre forskjellige medikamenter på veksten av cellene. I dette tilfelle er fire kolber av cellene ved samme konsentrasjon satt opp , en uten noen medikamenter som en kontroll , og en for hvert av de tre stoffer . Celler fjernes fra flaskene med jevne mellomrom , for eksempel daglig , telles og registreres. Cellen tallene er plottet på en grafisk fremstilling med tiden , men virkningen av medikamentene på cellevekst kan bli sammenlignet med kontrollen . Du trenger
Celler i suspensjon
Test rør
Pipets
Vekst medium
hemacytometer
Cover slip
Hånd telleapparat teller
Lens papir
Trypan blå
mikroskop
Vis flere instruksjoner
Cells
en
Swirl celler forsiktig for å få en jevn suspensjon . Fjern et volum av celler, for eksempel 1,0 milliliter ( ml) , med en pipette og overfør til et reagensrør . Fortynne celler til å gi 100.000 til 500.000 celler per ml - dette bør gi de ca 100 celler kreves for statistisk signifikans når man teller
2
Fortynn celler, hvis nødvendig , ved å legge 9,0 ml medium til . 1,0 ml av cellene. Bland og registrere fortynning. Dersom cellene er fremdeles altfor konsentrert , fjerne 1.0 ml fortynnet celler til et nytt rør , tilsett 9,0 ml av medium , blander og registrere fortynning. Pattedyrceller vokser vanligvis i området fra 100.000 til 5 millioner per ml , så bør 0-2 fortynninger være tilstrekkelig.
3
Bland celler fra den endelige fortynning. Fjerne en liten mengde , for eksempel 0,1 ml , og plasser i et nytt rør. Legg et tilsvarende volum trypan blå, mix og registrere fortynning. Døde celler ta opp trypan blå og vises blå under mikroskopet .
Counting
4
Polsk hemacytometer og dekkglass med linsepapir og sted dekkglass på hemocytameter rutenett. Tilsett en dråpe utvannet celler til V -form ved siden av rutenettet. Celler bevege seg under dekkglass ved Kapillarkrefter .
5
Plasser lysbildet på mikroskopet , fokus på nett og bruke hånden telleapparat å telle de levedyktige , ikke blå , celler . Cellene skal ikke overlappe hverandre , hvis for tett, utføre en annen fortynning. Hvis cellene er altfor tynne , utarbeide en mer konsentrert utvalg .
6
Fjern hemacytometer , clean , laste, og telle igjen . Telle hver celle prøve tre ganger .
Beregning
7
Beregn antall celler per ml . Den hemacytometer rutenettet er delt inn i ni store firkanter , hver med et volum på 0,1 ml .
8
Del antall celler telles med antall store firkanter som brukes ( ni hvis du bruker hele rutenettet ) , og multipliser med 10 000 for å få celler per ml . Multiplisere med fortynning faktor ( er) for den endelige konsentrasjonen .
9
Record datoen , sample, celletall , fortynningsfaktorer og endelig celle nummer per ml . Forbered en graf over celle tall plottet mot tiden for å vise cellevekst .
